Um certificado de análise (Certificate of Analysis, COA) indica que testes um laboratório realizou a um lote específico e qual foi o resultado. Nos péptidos sintéticos, há duas medições essenciais: a HPLC, que dá a pureza em percentagem, e a espectrometria de massa (MS), que mostra se a molécula correta está presente. Um COA só diz algo sobre o seu produto se o número de lote coincidir e se for possível verificar que laboratório realizou a análise.
O que deve constar de um COA
- O nome do produto e o número de lote, igual ao número do rótulo.
- A data da análise.
- O nome do laboratório que fez a medição, e não apenas o nome do vendedor.
- O método, por exemplo HPLC de fase reversa com deteção UV, e o comprimento de onda.
- A pureza em percentagem, de preferência acompanhada do cromatograma.
- A massa medida ao lado da massa teórica do péptido.
- Muitas vezes também o aspeto (por exemplo, «pó branco») e, por vezes, o teor de água ou de péptido.
- Uma assinatura, um código de verificação ou outra forma de confirmar o certificado junto do laboratório.
HPLC: o que significa «pureza de 99%»
Na HPLC (high-performance liquid chromatography), a amostra dissolvida é bombeada através de uma coluna. As substâncias da amostra saem em momentos diferentes e um detetor UV regista-as como picos. Os péptidos são geralmente medidos a cerca de 210 a 215 nm, onde a ligação peptídica absorve luz. Foi assim que procederam investigadores da Universidade de Gante no seu controlo de 98 péptidos de investigação [2].
A pureza é a área do pico principal em percentagem da área total dos picos. Chama-se a isto normalização por área [2]. «99%» significa, portanto: de tudo o que o detetor viu nesse comprimento de onda, 99% correspondia ao pico principal. O que não significa:
- Não diz que molécula é o pico principal. Para isso, é necessária a MS.
- As substâncias que não absorvem luz UV ou que saem da coluna ao mesmo tempo que o pico principal não contam, ou não contam em separado.
- Não é um teor. O pó de péptido contém também água e contraiões, como o trifluoroacetato (TFA) da síntese e da purificação [1][3]. Um pó com 99% de pureza por HPLC não é, portanto, constituído em 99% por péptido.
No cromatograma, procure um único pico principal bem definido, uma linha de base estável e os pequenos picos ao lado. Os laboratórios só reportam os picos pequenos acima de um limiar; no estudo de Gante, esse limite de reporte era de 0,1% do pico principal [2].
Espectrometria de massa: é mesmo o péptido correto
Um espectrómetro de massa mede a massa das moléculas, expressa como razão massa/carga (m/z). Nos péptidos, usa-se muitas vezes a ionização por electrospray (ESI). Um único péptido origina então vários picos, porque a molécula pode ter cargas diferentes. A partir desses picos calcula-se a massa, que deve corresponder à massa teórica resultante da sequência de aminoácidos.
Um desvio do tamanho exato de um aminoácido é um sinal conhecido. Na síntese em fase sólida, o método de produção habitual, formam-se facilmente sequências de deleção, às quais falta um aminoácido, e por vezes inserções, com um aminoácido a mais [1]. No estudo de Gante, 74% das impurezas identificadas tinham pelo menos um aminoácido em falta. Numa das amostras, a própria substância principal tinha mesmo uma estrutura diferente da do péptido encomendado [2]. Só com HPLC, isto não teria sido detetado.
Porque um COA nem sempre está correto
O estudo de Verbeke e colegas mostra por que razão vale a pena ler com espírito crítico. Os 98 péptidos foram todos entregues com um COA do fornecedor que indicava pelo menos 95% de pureza. No controlo próprio dos investigadores, apenas 43 atingiram esse limite [2]. Os investigadores concluem que confiar cegamente no certificado do fornecedor pode distorcer os resultados da investigação [2].
Um COA é, portanto, um ponto de partida. Ganha força à medida que se pode verificar mais: quem fez a medição, se o laboratório confirma o certificado e se o número de lote corresponde realmente à sua embalagem.
Sinais de alerta
- Não há número de lote, ou o número não consta do rótulo.
- O mesmo certificado para produtos ou lotes diferentes.
- Apenas uma percentagem, sem cromatograma nem método.
- Não há resultado de MS, ou não há massa teórica para comparação.
- Não há nome do laboratório, ou o laboratório não é encontrado ou não é contactável.
- Uma data de análise que não é compatível com a produção do seu lote.
O que um COA padrão não mede
A HPLC e a MS nada dizem sobre contaminação microbiológica, endotoxinas ou metais pesados; para isso existem testes próprios. O teor de péptido, ou seja, a parte do pó que é realmente péptido, também é uma determinação à parte. Se um destes testes não constar do certificado, parta do princípio de que não foi realizado. Além disso, um COA descreve o momento da análise: a forma como a conservação posterior afeta a qualidade é explicada em Como conservar os péptidos. No caso de uma caneta pré-cheia, a análise diz respeito à solução com que foi cheia, e não ao pó com que foi preparada; consulte Retatrutida em caneta ou em frasco.
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Leituras recomendadas
- Pureza, endotoxinas e metais pesados: o que se analisa nos péptidos?
- O que são péptidos? Explicação e conceitos-chave
- Base de conhecimento: péptidos e material de investigação explicados
Fontes
- D’Hondt M, Bracke N, Taevernier L, et al. Related impurities in peptide medicines. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 2014;101:2–30. doi:10.1016/j.jpba.2014.06.012
- Verbeke F, Wynendaele E, Braet S, et al. Quality evaluation of synthetic quorum sensing peptides used in R&D. Journal of Pharmaceutical Analysis 2015;5(3):169–181. doi:10.1016/j.jpha.2014.12.002
- Bachem. Handling and Storage Guidelines for Peptides. bachem.com (consultado a 30 de setembro de 2026)
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