Analyysitodistus (Certificate of Analysis, COA) kertoo, mitä testejä laboratorio on tehnyt yhdelle tietylle erälle ja mikä tulos oli. Synteettisillä peptideillä keskeistä on kaksi mittausta: HPLC, joka antaa puhtauden prosentteina, ja massaspektrometria (MS), joka näyttää, onko oikea molekyyli läsnä. COA kertoo jotakin juuri sinun tuotteestasi vain, jos eränumero täsmää ja jos voit selvittää, mikä laboratorio analyysin on tehnyt.
Mitä COA:ssa pitäisi olla
- Tuotteen nimi ja erä- tai lot-numero, sama kuin etiketissä.
- Analyysin päivämäärä.
- Mittauksen tehneen laboratorion nimi, ei pelkästään myyjän nimeä.
- Menetelmä, esimerkiksi käänteisfaasi-HPLC UV-detektiolla, sekä aallonpituus.
- Puhtaus prosentteina, mieluiten kromatogrammin kanssa.
- Mitattu massa peptidin teoreettisen massan rinnalla.
- Usein myös ulkonäkö (esimerkiksi ”valkoinen jauhe”) ja joskus vesi- tai peptidipitoisuus.
- Allekirjoitus, varmennuskoodi tai muu tapa tarkistaa todistus laboratoriolta.
HPLC: mitä ”puhtaus 99 %” tarkoittaa
HPLC:ssä (high-performance liquid chromatography) liuotettu näyte pumpataan kolonnin läpi. Näytteen aineet tulevat kolonnista ulos eri aikoina, ja UV-detektori rekisteröi ne piikkeinä. Peptidit mitataan yleensä noin 210–215 nm:n aallonpituudella, jolla peptidisidos absorboi valoa. Näin tekivät myös Gentin yliopiston tutkijat tarkastaessaan 98 tutkimuspeptidiä [2].
Puhtaus on pääpiikin pinta-ala prosentteina piikkien kokonaispinta-alasta. Tätä kutsutaan pinta-alanormalisoinniksi [2]. ”99 %” tarkoittaa siis: kaikesta, minkä detektori kyseisellä aallonpituudella havaitsi, 99 % osui pääpiikkiin. Mitä se ei tarkoita:
- Se ei kerro, mikä molekyyli pääpiikki on. Siihen tarvitaan MS.
- Aineet, jotka eivät absorboi UV-valoa tai jotka tulevat kolonnista samaan aikaan pääpiikin kanssa, eivät näy lainkaan tai erikseen.
- Se ei ole pitoisuus. Peptidijauhe sisältää myös vettä ja vastaioneja, kuten synteesistä ja puhdistuksesta peräisin olevaa trifluoriasetaattia (TFA) [1][3]. Jauhe, jonka HPLC-puhtaus on 99 %, ei siis koostu 99-prosenttisesti peptidistä.
Kromatogrammista kannattaa katsoa, onko siinä yksi selvä pääpiikki, tasainen perustaso ja sen vieressä pieniä piikkejä. Laboratoriot raportoivat pienet piikit vasta tietyn kynnyksen ylittyessä; Gentin tutkimuksessa raportointiraja oli 0,1 % pääpiikistä [2].
Massaspektrometria: onko kyseessä oikea peptidi
Massaspektrometri mittaa molekyylien massan massa-varaussuhteena (m/z). Peptideillä käytetään usein sähkösumutusionisaatiota (ESI). Yksi peptidi tuottaa silloin useita piikkejä, koska molekyylillä voi olla eri varauksia. Piikeistä lasketaan massa, jonka pitää vastata aminohapposekvenssistä laskettua teoreettista massaa.
Täsmälleen yhden aminohapon suuruinen poikkeama on tunnettu merkki. Kiinteäfaasisynteesissä, joka on tavallinen valmistusmenetelmä, syntyy helposti deleetiosekvenssejä, joista puuttuu aminohappo, ja joskus insertioita, joissa on yksi aminohappo liikaa [1]. Gentin tutkimuksessa 74 %:sta tunnistetuista epäpuhtauksista puuttui vähintään yksi aminohappo. Yhdessä näytteessä pääaineen rakenne osoittautui jopa toiseksi kuin tilatun peptidin [2]. Pelkällä HPLC:llä jälkimmäistä ei olisi huomattu.
Miksi COA ei aina pidä paikkaansa
Verbeken ja kollegoiden tutkimus osoittaa, miksi kriittinen lukeminen kannattaa. Kaikkien 98 peptidin mukana toimitettiin toimittajan COA, jossa ilmoitettiin vähintään 95 %:n puhtaus. Tutkijoiden omassa tarkastuksessa vain 43 ylitti tämän rajan [2]. Tutkijat päättelevät, että toimittajan todistukseen sokeasti luottaminen voi vääristää tutkimustuloksia [2].
COA on siis lähtökohta. Se on sitä vahvempi, mitä enemmän voit tarkistaa: kuka mittauksen teki, vahvistaako laboratorio todistuksen ja kuuluuko eränumero todella sinun pakkaukseesi.
Varoitusmerkit
- Eränumero puuttuu, tai numeroa ei ole etiketissä.
- Sama todistus eri tuotteille tai erille.
- Pelkkä prosenttiluku ilman kromatogrammia tai menetelmää.
- MS-tulos puuttuu, tai vertailuun ei ole teoreettista massaa.
- Laboratorion nimi puuttuu, tai laboratoriota ei löydä tai tavoita.
- Analyysipäivämäärä ei sovi yhteen erän valmistuksen kanssa.
Mitä tavallinen COA ei mittaa
HPLC ja MS eivät kerro mitään mikrobiologisesta kontaminaatiosta, endotoksiineista tai raskasmetalleista; niitä varten on omat testinsä. Myös peptidipitoisuus eli se, kuinka suuri osa jauheesta on todella peptidiä, on erillinen määritys. Jos tällaista testiä ei ole todistuksessa, on syytä olettaa, ettei sitä ole tehty. COA kuvaa lisäksi analyysihetkeä: siitä, miten säilytys sen jälkeen vaikuttaa laatuun, kerrotaan artikkelissa Peptidien säilytys. Esitäytetyssä kynässä kyse on täytetystä liuoksesta eikä jauheesta, josta se on valmistettu; ks. Retatrutidi kynässä vai pullossa.
Jos sinulla on kysyttävää meiltä tilaamasi tuotteen analyysista, ota yhteyttä ja mainitse tilausnumerosi. Tilaamisesta ja toimituksesta kerrotaan usein kysytyissä kysymyksissä, valikoima löytyy kaupasta ja kaikki retatrutidista retatrutidia käsittelevältä sivulta (englanniksi).
Lue lisää
- Puhtaus, endotoksiinit ja raskasmetallit: mitä peptideistä testataan?
- Mitä peptidit ovat? Selitys ja keskeiset käsitteet
- Tietopankki: peptidit ja tutkimusmateriaalit selitettynä
Lähteet
- D’Hondt M, Bracke N, Taevernier L, et al. Related impurities in peptide medicines. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 2014;101:2–30. doi:10.1016/j.jpba.2014.06.012
- Verbeke F, Wynendaele E, Braet S, et al. Quality evaluation of synthetic quorum sensing peptides used in R&D. Journal of Pharmaceutical Analysis 2015;5(3):169–181. doi:10.1016/j.jpha.2014.12.002
- Bachem. Handling and Storage Guidelines for Peptides. bachem.com (luettu 30. syyskuuta 2026)
Vain laboratorio- ja tutkimuskäyttöön. Clean Peptidesin tuotteita ei ole tarkoitettu käytettäviksi ihmisillä tai eläimillä. Tämä artikkeli on yleistä tietoa eikä lääketieteellistä neuvontaa.
