Et analysecertifikat (COA, certificate of analysis) angiver, hvilke tests et laboratorium har udført på én bestemt batch, og hvad resultaterne var. For syntetiske peptider er to målinger vigtigst: HPLC, der angiver renheden i procent, og massespektrometri (MS), der viser, om det rigtige molekyle er til stede. Et COA siger kun noget om dit produkt, hvis batchnummeret stemmer, og du kan kontrollere, hvilket laboratorium der har udført analysen.
Hvad et COA bør indeholde
- Produktnavnet og batch- eller lotnummeret, der svarer til nummeret på etiketten.
- Datoen for analysen.
- Navnet på laboratoriet, der har udført målingen, ikke kun sælgerens navn.
- Metoden, for eksempel reversed-phase HPLC med UV-detektion, og bølgelængden.
- Renheden i procent, helst med kromatogrammet vedlagt.
- Den målte masse ved siden af peptidets teoretiske masse.
- Ofte også udseendet (for eksempel ‘hvidt pulver’) og nogle gange vand- eller peptidindholdet.
- En underskrift, en verifikationskode eller en anden måde at kontrollere certifikatet hos laboratoriet på.
HPLC: hvad ‘99 % renhed’ betyder
Ved HPLC (højtryksvæskekromatografi) pumpes den opløste prøve gennem en kolonne. Stofferne i prøven forlader kolonnen på forskellige tidspunkter, og en UV-detektor registrerer dem som toppe. Peptider måles som regel ved omkring 210 til 215 nm, hvor peptidbindingen absorberer lys. Forskere ved universitetet i Gent brugte samme fremgangsmåde, da de testede 98 forskningspeptider [2].
Renheden er arealet af hovedtoppen i procent af det samlede topareal. Det kaldes arealnormalisering [2]. ‘99 %’ betyder altså, at 99 % af alt, hvad detektoren registrerede ved den bølgelængde, lå under hovedtoppen. Hvad det ikke betyder:
- Det fortæller ikke, hvilket molekyle hovedtoppen repræsenterer; det kræver MS.
- Stoffer, der ikke absorberer UV-lys, eller som forlader kolonnen samtidig med hovedtoppen, tælles ikke med eller tælles ikke separat.
- Det er ikke et mål for indhold. Peptidpulver indeholder også vand og modioner, for eksempel trifluoracetat (TFA) fra syntese og oprensning [1][3]. Et pulver med 99 % HPLC-renhed består derfor ikke af 99 % peptid.
Se på kromatogrammet efter én tydelig hovedtop, en stabil basislinje og de små toppe ved siden af. Laboratorier rapporterer kun små toppe over en tærskel; i studiet fra Gent var rapporteringstærsklen 0,1 % af hovedtoppen [2].
Massespektrometri: kontrol af, at det er det rigtige peptid
Et massespektrometer måler molekylers masse, udtrykt som forholdet mellem masse og ladning (m/z). Til peptider bruges ofte elektrosprayionisering (ESI). Med denne teknik giver ét peptid flere toppe, fordi molekylet kan bære forskellige ladninger. Massen beregnes ud fra disse toppe og bør svare til den teoretiske masse, der udledes af aminosyresekvensen.
En forskel på præcis én aminosyre er et velkendt advarselstegn. Fastfasesyntese, den gængse fremstillingsmetode, giver let deletionssekvenser, hvor en aminosyre mangler, og nogle gange insertioner med én ekstra aminosyre [1]. I studiet fra Gent manglede 74 % af de identificerede urenheder mindst én aminosyre. I én prøve viste hovedstoffet sig endda at have en anden struktur end det bestilte peptid [2]. HPLC alene ville ikke have afsløret det.
Hvorfor et COA ikke altid er pålideligt
Studiet af Verbeke og kolleger viser, hvorfor det betaler sig at læse kritisk. Alle 98 peptider blev leveret med et COA fra leverandøren, der angav en renhed på mindst 95 %. Da forskerne kontrollerede dem, levede kun 43 op til den tærskel [2]. De konkluderer, at blind tillid til leverandørens certifikat kan forvrænge forskningsresultater [2].
Et COA er derfor et udgangspunkt, og det bliver mere overbevisende, jo mere du kan kontrollere: hvem der har udført målingen, om laboratoriet bekræfter certifikatet, og om batchnummeret virkelig hører til din pakning.
Advarselstegn
- Intet batchnummer, eller et nummer, der ikke står på etiketten.
- Det samme certifikat til forskellige produkter eller batches.
- Kun en procentsats, uden kromatogram eller metode.
- Intet MS-resultat, eller ingen teoretisk masse at sammenligne med.
- Intet laboratorienavn, eller et laboratorium, der ikke kan findes eller kontaktes.
- En analysedato, der ikke passer med produktionen af din batch.
Hvad et standard-COA ikke måler
HPLC og MS siger intet om mikrobiologisk kontaminering, endotoksiner eller tungmetaller; der findes separate tests til det. Peptidindholdet (hvor meget af pulveret der faktisk er peptid) kræver også en separat bestemmelse. Står en sådan test ikke på certifikatet, så gå ud fra, at den ikke er udført. Et COA afspejler desuden kun tidspunktet for analysen; hvordan den efterfølgende opbevaring påvirker kvaliteten, forklares i Opbevaring af peptider. For en forfyldt pen er det den fyldte opløsning, der betyder noget, ikke det pulver, den er lavet af.
Har du et spørgsmål om analysen af et produkt, du har bestilt hos os? Kontakt os og oplys dit ordrenummer. Information om bestilling og forsendelse finder du i vores FAQ.
Produkter
Alle hætteglas og penne fra Clean Peptides har et batchnummer på etiketten. Hele sortimentet finder du i butikken, blandt andet:
Læs mere
- Renhed, endotoksiner og tungmetaller: hvad testes der i peptider?
- Hvad er peptider? Forklaring og centrale begreber
- Hvordan opbevarer du peptider, så de forbliver stabile?
- Retatrutid-pen eller hætteglas: hvad er forskellene?
- Vidensbase: peptider og forskningsmaterialer forklaret
Kilder
- D’Hondt M, Bracke N, Taevernier L, et al. Related impurities in peptide medicines. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 2014;101:2–30. doi:10.1016/j.jpba.2014.06.012
- Verbeke F, Wynendaele E, Braet S, et al. Quality evaluation of synthetic quorum sensing peptides used in R&D. Journal of Pharmaceutical Analysis 2015;5(3):169–181. doi:10.1016/j.jpha.2014.12.002
- Bachem. Handling and Storage Guidelines for Peptides. bachem.com (besøgt 30. september 2026)
Kun til laboratorie- og forskningsbrug. Clean Peptides’ produkter er ikke beregnet til brug på mennesker eller dyr. Denne artikel giver generel information og er ikke medicinsk rådgivning.
