Un certificado de análisis (Certificate of Analysis, COA) indica qué pruebas ha realizado un laboratorio sobre un lote concreto y cuál fue el resultado. En los péptidos sintéticos, lo esencial son dos mediciones: la HPLC, que da la pureza en porcentaje, y la espectrometría de masas (MS), que muestra si está presente la molécula correcta. Un COA solo dice algo sobre tu producto si el número de lote coincide y si puedes comprobar qué laboratorio hizo el análisis.
Qué debe figurar en un COA
- El nombre del producto y el número de lote, igual al de la etiqueta.
- La fecha del análisis.
- El nombre del laboratorio que hizo la medición, no solo el nombre del vendedor.
- El método, por ejemplo HPLC en fase inversa con detección UV, y la longitud de onda.
- La pureza en porcentaje, preferiblemente con el cromatograma.
- La masa medida junto a la masa teórica del péptido.
- A menudo también el aspecto (por ejemplo, «polvo blanco») y a veces el contenido de agua o de péptido.
- Una firma, un código de verificación u otra forma de comprobar el certificado con el laboratorio.
HPLC: qué significa «pureza del 99 %»
En la HPLC (high-performance liquid chromatography, cromatografía de líquidos de alta resolución), la muestra disuelta se bombea a través de una columna. Las sustancias de la muestra salen en momentos distintos y un detector UV las registra como picos. Los péptidos se miden normalmente a unos 210–215 nm, donde absorbe la luz el enlace peptídico. Así lo hicieron también los investigadores de la Universidad de Gante en su control de 98 péptidos de investigación [2].
La pureza es el área del pico principal como porcentaje del área total de los picos. Esto se llama normalización por áreas [2]. «99 %» significa, por tanto: de todo lo que el detector vio a esa longitud de onda, el 99 % correspondía al pico principal. Lo que no significa:
- No dice qué molécula es el pico principal. Para eso hace falta la MS.
- Las sustancias que no absorben luz UV o que salen de la columna al mismo tiempo que el pico principal no cuentan, o no se cuentan por separado.
- No es un contenido. El polvo peptídico también contiene agua y contraiones, como el trifluoroacetato (TFA) procedente de la síntesis y la purificación [1][3]. Un polvo con un 99 % de pureza por HPLC no es, por tanto, péptido en un 99 %.
En el cromatograma, busca un pico principal claro, una línea base estable y los pequeños picos de alrededor. Los laboratorios solo informan de los picos pequeños por encima de un umbral; en el estudio de Gante, ese límite de notificación era el 0,1 % del pico principal [2].
Espectrometría de masas: comprobar que es el péptido correcto
Un espectrómetro de masas mide la masa de las moléculas, expresada como relación masa/carga (m/z). En los péptidos se utiliza a menudo la ionización por electrospray (ESI). Un mismo péptido da entonces varios picos, porque la molécula puede llevar cargas distintas. A partir de esos picos se calcula la masa. Esta debe coincidir con la masa teórica que resulta de la secuencia de aminoácidos.
Una desviación del tamaño exacto de un aminoácido es una señal conocida. En la síntesis en fase sólida, el método de producción habitual, se forman con facilidad secuencias de deleción, en las que falta un aminoácido, y a veces inserciones con un aminoácido de más [1]. En el estudio de Gante, el 74 % de las impurezas identificadas tenía al menos un aminoácido ausente. En una muestra, la sustancia principal resultó incluso tener una estructura distinta de la del péptido pedido [2]. Con solo la HPLC, esto último no se habría detectado.
Por qué un COA no siempre es correcto
El estudio de Verbeke y sus colaboradores muestra por qué merece la pena leer con espíritu crítico. Los 98 péptidos se entregaron con un COA del proveedor que indicaba al menos un 95 % de pureza. En el control propio, solo 43 alcanzaron ese límite [2]. Los investigadores concluyen que confiar a ciegas en el certificado del proveedor puede sesgar los resultados de la investigación [2].
Así pues, un COA es un punto de partida. Gana valor cuanto más puedes comprobar: quién hizo la medición, si el laboratorio confirma el certificado y si el número de lote corresponde realmente a tu envase.
Señales de alerta
- Sin número de lote, o con un número que no figura en la etiqueta.
- El mismo certificado para productos o lotes diferentes.
- Solo un porcentaje, sin cromatograma ni método.
- Sin resultado de MS, o sin masa teórica con la que comparar.
- Sin nombre de laboratorio, o un laboratorio que no se encuentra o con el que no se puede contactar.
- Una fecha de análisis que no encaja con la producción de tu lote.
Lo que no mide un COA estándar
La HPLC y la MS no dicen nada sobre contaminación microbiológica, endotoxinas o metales pesados; para eso existen pruebas específicas. El contenido peptídico, es decir, qué parte del polvo es realmente péptido, también es una determinación aparte. Si una prueba así no figura en el certificado, da por hecho que no se ha realizado. Además, un COA describe el momento del análisis: cómo influye después la conservación en la calidad lo explicamos en Cómo conservar los péptidos. En una pluma precargada (PEN), el análisis se refiere a la solución envasada y no al polvo con el que se preparó; consulta Retatrutida en pluma o en vial.
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Para seguir leyendo
- Pureza, endotoxinas y metales pesados: qué se analiza en los péptidos
- ¿Qué son los péptidos? Explicación y conceptos clave
- Base de conocimiento: péptidos y material de investigación
Fuentes
- D’Hondt M, Bracke N, Taevernier L, et al. Related impurities in peptide medicines. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 2014;101:2–30. doi:10.1016/j.jpba.2014.06.012
- Verbeke F, Wynendaele E, Braet S, et al. Quality evaluation of synthetic quorum sensing peptides used in R&D. Journal of Pharmaceutical Analysis 2015;5(3):169–181. doi:10.1016/j.jpha.2014.12.002
- Bachem. Handling and Storage Guidelines for Peptides. bachem.com (consultado el 30 de septiembre de 2026)
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