Un certificat d’analyse (Certificate of Analysis, COA) indique quels tests un laboratoire a réalisés sur un lot précis et quels en ont été les résultats. Pour les peptides de synthèse, tout repose sur deux mesures : la HPLC, qui donne la pureté en pourcentage, et la spectrométrie de masse (MS), qui montre si la bonne molécule est présente. Un COA ne dit quelque chose de votre produit que si le numéro de lot correspond et si vous pouvez vérifier quel laboratoire a réalisé l’analyse.
Ce qui doit figurer sur un COA
- Le nom du produit et le numéro de lot, identique à celui de l’étiquette.
- La date de l’analyse.
- Le nom du laboratoire qui a effectué la mesure, et pas seulement celui du vendeur.
- La méthode, par exemple une HPLC en phase inverse avec détection UV, et la longueur d’onde.
- La pureté en pourcentage, de préférence accompagnée du chromatogramme.
- La masse mesurée à côté de la masse théorique du peptide.
- Souvent aussi l’aspect (par exemple « poudre blanche ») et parfois la teneur en eau ou en peptide.
- Une signature, un code de vérification ou un autre moyen de contrôler le certificat auprès du laboratoire.
HPLC : ce que signifie « pureté 99 % »
En HPLC (high-performance liquid chromatography, chromatographie liquide haute performance), l’échantillon dissous est pompé à travers une colonne. Les substances qu’il contient en sortent à des moments différents et un détecteur UV les enregistre sous forme de pics. Les peptides sont généralement mesurés vers 210 à 215 nm, longueur d’onde à laquelle la liaison peptidique absorbe la lumière. C’est ainsi qu’ont procédé des chercheurs de l’université de Gand lors de leur contrôle de 98 peptides de recherche [2].
La pureté correspond à l’aire du pic principal en pourcentage de l’aire totale des pics. C’est ce qu’on appelle la normalisation des aires [2]. « 99 % » signifie donc : de tout ce que le détecteur a vu à cette longueur d’onde, 99 % se trouvait sous le pic principal. Ce que cela ne signifie pas :
- Cela ne dit pas quelle molécule constitue le pic principal. Pour cela, il faut la MS.
- Les substances qui n’absorbent pas la lumière UV, ou qui sortent de la colonne en même temps que le pic principal, ne sont pas comptées, ou pas séparément.
- Ce n’est pas une teneur. La poudre de peptide contient aussi de l’eau et des contre-ions, comme le trifluoroacétate (TFA) issu de la synthèse et de la purification [1][3]. Une poudre d’une pureté HPLC de 99 % n’est donc pas constituée à 99 % de peptide.
Sur le chromatogramme, recherchez un pic principal bien net, une ligne de base régulière et les petits pics voisins. Les laboratoires ne signalent les petits pics qu’au-dessus d’un seuil ; dans l’étude de Gand, ce seuil de déclaration était fixé à 0,1 % du pic principal [2].
Spectrométrie de masse : s’agit-il bien du bon peptide
Un spectromètre de masse mesure la masse des molécules, exprimée en rapport masse sur charge (m/z). Pour les peptides, on utilise souvent l’ionisation par électronébulisation (ESI). Un même peptide donne alors plusieurs pics, car la molécule peut porter différentes charges. La masse est calculée à partir de ces pics. Elle doit correspondre à la masse théorique déduite de la séquence d’acides aminés.
Un écart correspondant exactement à un acide aminé est un signal connu. La synthèse en phase solide, la méthode de production courante, génère facilement des séquences de délétion, auxquelles il manque un acide aminé, et parfois des insertions comportant un acide aminé en trop [1]. Dans l’étude de Gand, 74 % des impuretés identifiées présentaient au moins un acide aminé manquant. Pour un échantillon, la substance principale avait même une autre structure que le peptide commandé [2]. Avec la seule HPLC, ce dernier point serait passé inaperçu.
Pourquoi un COA n’est pas toujours exact
L’étude de Verbeke et de ses collègues montre pourquoi une lecture critique est utile. Les 98 peptides étaient tous livrés avec un COA du fournisseur indiquant une pureté d’au moins 95 %. Lors du contrôle des chercheurs, seuls 43 d’entre eux atteignaient ce seuil [2]. Les auteurs concluent qu’une confiance aveugle dans le certificat du fournisseur peut fausser les résultats de recherche [2].
Un COA est donc un point de départ. Il gagne en valeur à mesure que vous pouvez vérifier davantage : qui a effectué la mesure, si le laboratoire confirme le certificat et si le numéro de lot correspond réellement à votre conditionnement.
Signaux d’alerte
- Pas de numéro de lot, ou un numéro qui ne figure pas sur l’étiquette.
- Le même certificat pour différents produits ou lots.
- Seulement un pourcentage, sans chromatogramme ni méthode.
- Pas de résultat MS, ou pas de masse théorique pour comparer.
- Pas de nom de laboratoire, ou un laboratoire introuvable ou injoignable.
- Une date d’analyse incompatible avec la production de votre lot.
Ce qu’un COA standard ne mesure pas
La HPLC et la MS ne disent rien de la contamination microbiologique, des endotoxines ou des métaux lourds ; il existe des tests distincts pour cela. La teneur en peptide, c’est-à-dire la part de la poudre qui est réellement du peptide, fait elle aussi l’objet d’une détermination distincte. Si un tel test ne figure pas sur le certificat, partez du principe qu’il n’a pas été réalisé. Un COA reflète en outre l’état au moment de l’analyse : l’influence de la conservation ultérieure sur la qualité est expliquée dans Conserver les peptides. Pour un stylo prérempli, l’analyse porte sur la solution de remplissage et non sur la poudre qui a servi à la préparer ; voir Rétatrutide en stylo ou en flacon.
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Pour aller plus loin
- Pureté, endotoxines et métaux lourds : que faut-il tester sur les peptides ?
- Que sont les peptides ? Explications et notions clés
- Base de connaissances : peptides et matériel de recherche expliqués
Sources
- D’Hondt M, Bracke N, Taevernier L, et al. Related impurities in peptide medicines. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 2014;101:2–30. doi:10.1016/j.jpba.2014.06.012
- Verbeke F, Wynendaele E, Braet S, et al. Quality evaluation of synthetic quorum sensing peptides used in R&D. Journal of Pharmaceutical Analysis 2015;5(3):169–181. doi:10.1016/j.jpha.2014.12.002
- Bachem. Handling and Storage Guidelines for Peptides. bachem.com (consulté le 30 septembre 2026)
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