COA lezen: HPLC-zuiverheid en MS uitgelegd

Door de Redactie Clean Peptides · Gepubliceerd op 30 september 2026

Een analysecertificaat (Certificate of Analysis, COA) vermeldt welke tests een laboratorium op één bepaalde batch heeft uitgevoerd en wat de uitkomst was. Bij synthetische peptiden draait het om twee metingen: HPLC, die de zuiverheid als percentage geeft, en massaspectrometrie (MS), die laat zien of het juiste molecuul aanwezig is. Een COA zegt alleen iets over jouw product als het batchnummer overeenkomt en als je kunt nagaan welk lab de analyse heeft gedaan.

Wat er op een COA hoort te staan

Productnaam en batch- of lotnummer, gelijk aan het nummer op het etiket.
De datum van de analyse.
De naam van het laboratorium dat de meting deed, niet alleen de naam van de verkoper.
De methode, bijvoorbeeld reversed-phase HPLC met UV-detectie, en de golflengte.
De zuiverheid in procenten, bij voorkeur met het chromatogram erbij.
De gemeten massa naast de theoretische massa van het peptide.
Vaak ook het uiterlijk (bijvoorbeeld ‘wit poeder’) en soms het water- of peptidegehalte.
Een handtekening, verificatiecode of andere manier om het certificaat bij het lab te controleren.

HPLC: wat ‘zuiverheid 99%’ betekent

Bij HPLC (high-performance liquid chromatography) wordt het opgeloste monster door een kolom gepompt. De stoffen in het monster komen er op verschillende momenten uit en een UV-detector registreert ze als pieken. Peptiden worden meestal gemeten rond 210 tot 215 nm, waar de peptidebinding licht absorbeert. Zo deden onderzoekers van de Universiteit Gent het ook bij hun controle van 98 onderzoekspeptiden [2].

De zuiverheid is het oppervlak van de hoofdpiek als percentage van het totale piekoppervlak. Dat heet oppervlaktenormalisatie [2]. ‘99%’ betekent dus: van alles wat de detector bij die golflengte zag, viel 99% onder de hoofdpiek. Wat het niet betekent:

Het zegt niet welk molecuul de hoofdpiek is. Daarvoor is MS nodig.
Stoffen die geen UV-licht absorberen of tegelijk met de hoofdpiek uit de kolom komen, tellen niet of niet apart mee.
Het is geen gehalte. Peptidepoeder bevat ook water en tegenionen, zoals trifluoracetaat (TFA) uit de synthese en zuivering [1][3]. Een poeder met 99% HPLC-zuiverheid bestaat dus niet voor 99% uit peptide.

Kijk op het chromatogram naar één duidelijke hoofdpiek, een rustige basislijn en de kleine pieken ernaast. Labs rapporteren kleine pieken pas boven een drempel; in het Gentse onderzoek lag die rapportagegrens op 0,1% van de hoofdpiek [2].

Massaspectrometrie: is het wel het juiste peptide

Een massaspectrometer meet de massa van moleculen, uitgedrukt als massa-ladingverhouding (m/z). Bij peptiden wordt vaak elektrosprayionisatie (ESI) gebruikt. Eén peptide levert dan meerdere pieken op, omdat het molecuul verschillende ladingen kan dragen. Uit die pieken wordt de massa berekend. Die hoort overeen te komen met de theoretische massa die volgt uit de aminozuurvolgorde.

Een afwijking ter grootte van precies één aminozuur is een bekend signaal. Bij vastefasesynthese, de gangbare productiemethode, ontstaan gemakkelijk deletiesequenties, waarin een aminozuur ontbreekt, en soms inserties met een aminozuur te veel [1]. In het Gentse onderzoek had 74% van de geïdentificeerde verontreinigingen minstens één ontbrekend aminozuur. Bij één monster bleek de hoofdstof zelfs een andere structuur te hebben dan het bestelde peptide [2]. Met alleen HPLC was dat laatste niet opgevallen.

Waarom een COA niet altijd klopt

Het onderzoek van Verbeke en collega’s laat zien waarom kritisch lezen loont. Alle 98 peptiden werden geleverd met een COA van de leverancier dat minstens 95% zuiverheid vermeldde. Bij de eigen controle haalden er maar 43 die grens [2]. De onderzoekers concluderen dat blind vertrouwen op het certificaat van de leverancier onderzoeksresultaten kan vertekenen [2].

Een COA is dus een startpunt. Het wordt sterker naarmate je meer kunt controleren: wie de meting deed, of het lab het certificaat bevestigt en of het batchnummer echt bij jouw verpakking hoort.

Rode vlaggen

Geen batchnummer, of een nummer dat niet op het etiket staat.
Hetzelfde certificaat voor verschillende producten of batches.
Alleen een percentage, zonder chromatogram of methode.
Geen MS-resultaat, of geen theoretische massa om mee te vergelijken.
Geen labnaam, of een lab dat niet te vinden of niet te bereiken is.
Een analysedatum die niet past bij de productie van jouw batch.

Wat een standaard-COA niet meet

HPLC en MS zeggen niets over microbiologische verontreiniging, endotoxinen of zware metalen; daarvoor bestaan aparte tests. Ook het peptidegehalte, dus hoeveel van het poeder echt peptide is, is een aparte bepaling. Staat zo’n test niet op het certificaat, ga er dan van uit dat hij niet is gedaan. Een COA beschrijft bovendien het moment van analyse: hoe opslag daarna de kwaliteit beïnvloedt, lees je in Peptiden bewaren. Bij een voorgevulde pen gaat het om de afgevulde oplossing en niet om het poeder waarmee die is gemaakt; zie Retatrutide pen of vial.

Heb je een vraag over de analyse van een product dat je bij ons hebt besteld? Neem dan contact op en vermeld je ordernummer. Informatie over bestellen en verzenden staat in de veelgestelde vragen, het assortiment vind je in de winkel en alles over retatrutide op de pagina over retatrutide.

Verder lezen

Bronnen

D’Hondt M, Bracke N, Taevernier L, et al. Related impurities in peptide medicines. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 2014;101:2–30. doi:10.1016/j.jpba.2014.06.012
Verbeke F, Wynendaele E, Braet S, et al. Quality evaluation of synthetic quorum sensing peptides used in R&D. Journal of Pharmaceutical Analysis 2015;5(3):169–181. doi:10.1016/j.jpha.2014.12.002
Bachem. Handling and Storage Guidelines for Peptides. bachem.com (geraadpleegd op 30 september 2026)

Uitsluitend voor laboratoriumonderzoek. De producten van Clean Peptides zijn niet bedoeld voor gebruik bij mensen of dieren. Dit artikel geeft algemene informatie en is geen medisch advies.