Renhed, endotoksiner og tungmetaller: hvad testes der i peptider?

Af Clean Peptides’ redaktion · Udgivet 6. oktober 2026

To analyser er standard for syntetiske peptider: HPLC for renhed og massespektrometri (MS) for identitet. Derudover findes der yderligere tests: nettopeptidindhold, endotoksiner (med LAL- eller rFC-test), tungmetaller og andre grundstoffer (med ICP-MS eller ICP-OES), restopløsningsmidler og modionen trifluoracetat (TFA). Analysecertifikatet (COA) viser, hvilke tests der er udført på en batch. Står en test ikke på certifikatet, så gå ud fra, at den ikke er udført.

Renhed, indhold og identitet

Renhed måles med HPLC. Resultatet er arealet af hovedtoppen i procent af alle detekterede toppe. ‘99 % ren’ betyder altså, at 99 % af UV-signalet stammer fra det korrekte peptid; det siger intet om, hvor meget af pulveret der er peptid.

Nettopeptidindholdet besvarer det andet spørgsmål: Hvor stor en del af det pulver, du afvejer, er faktisk peptid? Lyofiliseret peptidpulver indeholder ikke kun peptidet, men også vand og modioner, for eksempel trifluoracetat (TFA) fra HPLC-oprensningen [5]. Indholdet bestemmes separat, for eksempel ved aminosyreanalyse, og vandindholdet ofte ved Karl Fischer-metoden. Det har betydning for forskere: Beregner du en koncentration ud fra den afvejede mængde pulver uden dette tal, overvurderer du den.

Identiteten bekræftes ved massespektrometri. Den målte masse bør svare til peptidets teoretiske masse. Hvordan du læser HPLC- og MS-resultater på et certifikat, forklares i Sådan læser du et analysecertifikat (COA).

Endotoksiner: LAL-testen og rekombinant faktor C

Endotoksiner er lipopolysakkarider (LPS) fra cellevæggen hos gramnegative bakterier. De frigives, når bakterier deler sig, og når de dør. I blodet udløser de en kraftig inflammatorisk reaktion fra immunsystemet, og derfor tester medicinalindustrien rutinemæssigt for dem [1]. De kan også forstyrre laboratorieforskning: En cellulær reaktion på endotoksin kan fejlagtigt blive tilskrevet det peptid, der undersøges.

  • LAL-test. Den mest udbredte test bruger et ekstrakt af hesteskokrabbens blodceller (Limulus amebocyte lysate). Endotoksin udløser en målbar koagulationsreaktion i dette ekstrakt [1].
  • Rekombinant faktor C (rFC). Et alternativ, der ikke bruger dyreblod. Det anvender en laboratoriefremstillet (rekombinant) udgave af faktor C, et koagulationsenzym fra hesteskokrabben. Fordi rFC ikke omfatter faktor G-vejen, reagerer den mere specifikt på endotoksin. I sammenlignende studier stemte resultaterne godt overens med LAL-testens [2].

Resultatet angives i EU (endotoksinenheder) pr. milligram eller pr. milliliter. Bemærk, at nogle opløsninger kan maskere endotoksin, så en test undervurderer det, et fænomen der kaldes low endotoxin recovery [1]. En pålidelig endotoksintest valideres derfor til det konkrete produkt.

Tungmetaller og andre grundstoffer: ICP-MS

I lægemidler taler man i dag om ‘elementære urenheder’. Ifølge den internationale retningslinje ICH Q3D kan de stamme fra katalysatorer, der bruges i syntesen, fra kontakt med produktionsudstyr eller emballage eller fra andre bestanddele [4]. Retningslinjen inddeler grundstofferne i klasser. Klasse 1 består af arsen, cadmium, kviksølv og bly: giftige grundstoffer, der sjældent eller aldrig bruges i produktionen [4].

Tidligere blev der udført en generel ‘tungmetaltest’. Siden ICH Q3D er den erstattet af en risikovurdering og målinger med teknikker baseret på induktivt koblet plasma: ICP-OES og ICP-MS [3]. ICP-MS er den mest følsomme af de to og er først og fremmest nødvendig for at bestemme lave koncentrationer af arsen og bly nøjagtigt [3]. Et certifikat bør angive den målte værdi og den anvendte teknik for hvert grundstof.

Restopløsningsmidler og TFA

Restopløsningsmidler er flygtige organiske forbindelser, der bruges eller dannes under produktionen og ikke fjernes fuldstændigt. Retningslinjen ICH Q3C inddeler dem i tre klasser: klasse 1 (skal undgås), klasse 2 (skal begrænses; herunder acetonitril) og klasse 3 (lav toksicitet, for eksempel ethanol og eddikesyre). De måles som regel ved gaskromatografi [4].

TFA (trifluoreddikesyre) bruges som opløsningsmiddel ved HPLC-oprensning. Derfor fås oprensede peptider ofte som TFA-salte [5]. I et klassisk studie hæmmede lave koncentrationer af TFA væksten af dyrkede knogle- og bruskceller. Det kan maskere en effekt af selve peptidet eller antyde en, der ikke var der. Forskerne anbefalede at omdanne peptider, der skal bruges i celleforsøg, til hydrochlorid eller et lignende salt [5]. Angiver et certifikat ikke saltformen, så spørg efter den.

Hvad et godt analysecertifikat angiver

  • Batchnummeret, der svarer til nummeret på etiketten, samt analysedatoen og laboratoriets navn.
  • Renhed ved HPLC, helst med kromatogrammet og den anvendte bølgelængde.
  • Identitet ved MS: målt versus teoretisk masse.
  • Saltformen (for eksempel TFA eller acetat) og, hvis det er bestemt, nettopeptidindholdet og vandindholdet.
  • For hver yderligere test, for eksempel endotoksiner, grundstoffer eller opløsningsmidler: metoden, enheden og den målte værdi.

Hos Clean Peptides har alle hætteglas og penne et batchnummer på etiketten. Har du et spørgsmål om analysen af et produkt, du har bestilt? Kontakt os, og oplys batchnummeret.

Produkter og videre læsning

Produkter

Hele sortimentet finder du i butikken, blandt andet BPC-157 10 mg, TB-500 10 mg, GHK-Cu 100 mg og MOTS-c 10 mg.

Læs mere

Kilder

  1. Gorman A, Golovanov AP. Lipopolysaccharide Structure and the Phenomenon of Low Endotoxin Recovery. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 2022;180:289–307. doi:10.1016/j.ejpb.2022.10.006
  2. Bolden J, Knutsen C, Levin J, et al. Currently Available Recombinant Alternatives to Horseshoe Crab Blood Lysates: Are They Comparable for the Detection of Environmental Bacterial Endotoxins? A Review. PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology 2020;74(5):602–611. doi:10.5731/pdajpst.2020.012187
  3. Janchevska K, Stafilov T, Memed-Sejfulah S, et al. ICH Q3D based elemental impurities study in liquid pharmaceutical dosage form with high daily intake – comparative analysis by ICP-OES and ICP-MS. Drug Development and Industrial Pharmacy 2020;46(3):456–461. doi:10.1080/03639045.2020.1724136
  4. ICH. Guideline for elemental impurities Q3D(R2) (2022) og Impurities: guideline for residual solvents Q3C(R9) (2024). Q3D(R2) · Q3C(R9) (besøgt 30. september 2026)
  5. Cornish J, Callon KE, Lin CQ, et al. Trifluoroacetate, a contaminant in purified proteins, inhibits proliferation of osteoblasts and chondrocytes. American Journal of Physiology 1999;277(5):E779–E783. doi:10.1152/ajpendo.1999.277.5.E779

Kun til laboratorie- og forskningsbrug. Clean Peptides’ produkter er ikke beregnet til brug på mennesker eller dyr. Denne artikel giver generel information og er ikke medicinsk rådgivning.

Rul til toppen