Puhtaus, endotoksiinit ja raskasmetallit: mitä peptideistä testataan?

Clean Peptidesin toimitus · Julkaistu 6. lokakuuta 2026

Synteettisille peptideille tehdään yleensä kaksi analyysia: HPLC puhtauden ja massaspektrometria (MS) tunnistuksen määrittämiseen. Lisäksi on olemassa täydentäviä testejä: nettopeptidipitoisuus, endotoksiinit (LAL- tai rFC-testillä), raskasmetallit ja muut alkuaineet (ICP-MS:llä tai ICP-OES:llä), liuotinjäämät sekä vastaioni trifluoriasetaatti (TFA). Analyysitodistuksesta (COA) näkee, mitkä testit erälle on tehty. Jos testiä ei ole todistuksessa, on syytä olettaa, ettei sitä ole tehty.

Puhtaus, pitoisuus ja tunnistus

Puhtaus mitataan HPLC:llä. Tulos on pääpiikin pinta-ala prosentteina kaikista piikeistä, jotka detektori havaitsee. ”99 % puhdas” tarkoittaa siis, että 99 % UV-signaalista kuuluu oikealle peptidille. Se ei kerro, kuinka suuri osa jauheesta on peptidiä.

Nettopeptidipitoisuus vastaa tähän toiseen kysymykseen: mikä osa punnitusta jauheesta on todella peptidiä? Pakastekuivattu peptidijauhe sisältää peptidin lisäksi vettä ja vastaioneja, kuten HPLC-puhdistuksesta peräisin olevaa trifluoriasetaattia (TFA) [5]. Pitoisuus määritetään erikseen, esimerkiksi aminohappoanalyysilla, ja vesipitoisuus usein Karl Fischer -menetelmällä. Tutkijalle tämä on tärkeää: jos pitoisuus lasketaan punnitun jauhemäärän perusteella ilman tätä tietoa, tulos on liian suuri.

Tunnistus vahvistetaan massaspektrometrialla. Mitatun massan pitää vastata peptidin teoreettista massaa. HPLC- ja MS-tulosten lukemisesta todistuksesta kerrotaan artikkelissa Miten analyysitodistus (COA) luetaan.

Endotoksiinit: LAL-testi ja rekombinantti tekijä C

Endotoksiinit ovat gramnegatiivisten bakteerien soluseinän lipopolysakkarideja (LPS). Niitä vapautuu bakteerien jakautuessa ja kuollessa. Veressä ne laukaisevat voimakkaan immuunijärjestelmän tulehdusreaktion, minkä vuoksi niitä valvotaan lääketeollisuudessa rutiininomaisesti [1]. Myös laboratoriotutkimuksessa ne voivat häiritä: solujen reaktio endotoksiiniin voidaan virheellisesti tulkita tutkittavan peptidin aiheuttamaksi.

  • LAL-testi. Yleisimmin käytetty testi perustuu hevosenkenkäravun verisoluista valmistettuun uutteeseen (Limulus amebocyte lysate). Endotoksiini käynnistää uutteessa hyytymisreaktion, joka voidaan mitata [1].
  • Rekombinantti tekijä C (rFC). Vaihtoehto ilman eläinperäistä verta. Siinä käytetään laboratoriossa (rekombinanttina) tuotettua versiota tekijä C:stä, hevosenkenkäravun hyytymisentsyymistä. Koska rFC ei tunnista niin sanottua tekijä G -reittiä, se reagoi spesifisemmin endotoksiiniin. Vertailevissa tutkimuksissa tulokset vastasivat hyvin LAL-testin tuloksia [2].

Tulos ilmoitetaan endotoksiiniyksikköinä (EU) milligrammaa tai millilitraa kohden. Huomaa: jotkin liuokset voivat peittää endotoksiinia, jolloin testi löytää sitä liian vähän. Ilmiötä kutsutaan nimellä low endotoxin recovery [1]. Luotettava endotoksiinitesti on siksi validoitu kyseiselle tuotteelle.

Raskasmetallit ja muut alkuaineet: ICP-MS

Lääkkeissä näistä puhutaan nykyään alkuaine-epäpuhtauksina. Kansainvälisen ICH Q3D -ohjeen mukaan ne voivat olla peräisin synteesin katalyyteistä, kosketuksesta tuotantolaitteisiin tai pakkauksiin taikka muista ainesosista [4]. Ohje jakaa alkuaineet luokkiin. Luokan 1 muodostavat arseeni, kadmium, elohopea ja lyijy: myrkylliset alkuaineet, joita valmistuksessa käytetään tuskin lainkaan [4].

Aiemmin tehtiin yleinen ”raskasmetallitesti”. ICH Q3D:n myötä se on korvattu riskinarvioinnilla ja mittauksilla, joissa käytetään induktiivisesti kytkettyyn plasmaan perustuvia tekniikoita: ICP-OES:ää ja ICP-MS:ää [3]. ICP-MS on herkin, ja sitä tarvitaan erityisesti pienten arseeni- ja lyijypitoisuuksien tarkkaan määrittämiseen [3]. Todistuksessa pitäisi ilmoittaa jokaisen alkuaineen mitattu arvo ja käytetty tekniikka.

Liuotinjäämät ja TFA

Liuotinjäämät ovat haihtuvia orgaanisia aineita, joita käytetään tai syntyy valmistuksessa ja jotka eivät poistu kokonaan. ICH Q3C -ohje jakaa ne kolmeen luokkaan: luokka 1 (vältettävät), luokka 2 (rajoitettavat; tähän kuuluu asetonitriili) ja luokka 3 (vähäisen toksisuuden liuottimet, kuten etanoli ja etikkahappo). Ne mitataan yleensä kaasukromatografialla [4].

TFA:ta (trifluorietikkahappo) käytetään liuottimena HPLC-puhdistuksessa. Siksi puhdistetut peptidit ovat usein TFA-suoloja [5]. Klassisessa tutkimuksessa TFA esti pieninä pitoisuuksina viljeltyjen luu- ja rustosolujen kasvua. Tämä saattoi peittää peptidin oman vaikutuksen tai päinvastoin antaa vaikutelman vaikutuksesta, jota ei ollut. Tutkijat suosittelivat, että soluviljelykokeisiin tarkoitetut peptidit muutetaan hydrokloridi- tai vastaavaksi suolaksi [5]. Jos todistuksessa ei mainita suolamuotoa, sitä kannattaa kysyä.

Mitä hyvässä analyysitodistuksessa ilmoitetaan

  • Eränumero, joka on sama kuin etiketissä, sekä analyysin päivämäärä ja laboratorion nimi.
  • Puhtaus HPLC:llä, mieluiten kromatogrammin ja käytetyn aallonpituuden kanssa.
  • Tunnistus MS:llä: mitattu massa teoreettisen massan rinnalla.
  • Suolamuoto (esimerkiksi TFA tai asetaatti) ja, jos ne on määritetty, nettopeptidipitoisuus ja vesipitoisuus.
  • Jokaisesta täydentävästä testistä, kuten endotoksiineista, alkuaineista tai liuottimista: menetelmä, yksikkö ja mitattu arvo.

Clean Peptidesillä jokaisen pullon ja kynän etiketissä on eränumero. Jos sinulla on kysyttävää tilaamasi tuotteen analyysista, ota yhteyttä ja mainitse eränumero.

Tuotteet ja lisälukemista

Tuotteet

Koko valikoima löytyy kaupasta, esimerkiksi BPC-157 10 mg, TB-500 10 mg, GHK-Cu 100 mg ja MOTS-c 10 mg.

Lue lisää

Lähteet

  1. Gorman A, Golovanov AP. Lipopolysaccharide Structure and the Phenomenon of Low Endotoxin Recovery. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 2022;180:289–307. doi:10.1016/j.ejpb.2022.10.006
  2. Bolden J, Knutsen C, Levin J, et al. Currently Available Recombinant Alternatives to Horseshoe Crab Blood Lysates: Are They Comparable for the Detection of Environmental Bacterial Endotoxins? A Review. PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology 2020;74(5):602–611. doi:10.5731/pdajpst.2020.012187
  3. Janchevska K, Stafilov T, Memed-Sejfulah S, et al. ICH Q3D based elemental impurities study in liquid pharmaceutical dosage form with high daily intake – comparative analysis by ICP-OES and ICP-MS. Drug Development and Industrial Pharmacy 2020;46(3):456–461. doi:10.1080/03639045.2020.1724136
  4. ICH. Guideline for elemental impurities Q3D(R2) (2022) ja Impurities: guideline for residual solvents Q3C(R9) (2024). Q3D(R2) · Q3C(R9) (luettu 30. syyskuuta 2026)
  5. Cornish J, Callon KE, Lin CQ, et al. Trifluoroacetate, a contaminant in purified proteins, inhibits proliferation of osteoblasts and chondrocytes. American Journal of Physiology 1999;277(5):E779–E783. doi:10.1152/ajpendo.1999.277.5.E779

Vain laboratorio- ja tutkimuskäyttöön. Clean Peptidesin tuotteita ei ole tarkoitettu käytettäviksi ihmisillä tai eläimillä. Tämä artikkeli on yleistä tietoa eikä lääketieteellistä neuvontaa.

Vieritä sivun alkuun